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過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品名稱：過氧化氫酶測定試劑盒
產(chǎn)品英文名：Catalase (CAT) Assay Kit
產(chǎn)品貨號：BC0200                          產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣                      產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；           參考價格：130
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：過氧化氫酶試劑盒

簡要介紹：
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能夠分解H2O2，使反應(yīng)溶液240nm下的吸光度隨反應(yīng)時間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計算出CAT活性。

產(chǎn)品詳細(xì)描述

商品貨號：	商品品牌：	規(guī)格	基本售價：	選擇規(guī)格
BC0200-50管/48樣	Solarbio	50管/48樣	130.00元

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 100μL×3 瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說明： 
CAT(EC1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是主要的 H2O2清除酶，在活 性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。 H2O2在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能夠分解 H2O2，使反應(yīng)溶液 240nm 下的吸光度隨反應(yīng)時 間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計算出 CAT 活性。

操作步驟： 
一、粗酶液提取： 
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）： 提取液體積（ml）為 500-1000:1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì) 菌或細(xì)胞（功率 20%或 200w，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復(fù) 30 次）；8000g4℃離心 10 分鐘，取上 清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（ml）為 1：5-10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加 入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
二、CAT 測定操作
1、 分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長 240nm 處，蒸餾水調(diào)零。
2、 CAT 檢測工作液的配置：用時在每瓶試劑二（100μL）中加入 20ml 試劑一，充分混勻，作為工 作液；用不完的試劑 4℃保存一周。
3、 測定前將 CAT 檢測工作液 37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）水浴 10min。
4、 取 1mLCAT 檢測工作液于 1mL 石英比色皿中，再加入 35μL 樣本，混勻 5s；室溫下立即測定 240nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算ΔA=A1-A2
三、CAT 活性計算：
1、 血清（漿）CAT 活力的計算：
單位的定義：每毫升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmolH2O2降解定義為一個酶活力單
位。CAT（U/mL）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷V 樣÷T=678×ΔA
2、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 CAT 活力計算：
（1） 按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/mgprot）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷（V 樣×Cpr）÷T=678×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算： 單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/g 鮮重）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T=678×ΔA÷W
 3、 按細(xì)菌或細(xì)胞中 CAT 活力計算： 單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞在每分鐘反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmolH2O2降解定義為一個 酶活力單位。
CAT（U/104 cell）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T=1.356×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.035×10-3L；ε:H2O2摩爾吸光系數(shù)，4.36×104L/mol/cm；d：比色皿 光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.035ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時間，1min。 W，樣本質(zhì)量，g；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。

過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒